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郭晓奎
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问号钩端螺旋体的比较基因组学研究
目的研制钩端螺旋体基因组DNA芯片,揭示不同问号钩端螺旋体菌株之间基因组成上的差异。方法制备了含有3528个ORF的钩体赖株基因芯片,以比较基因组杂交为研究手段, 对12株问号钩端螺旋体进行比较基因组分析。结果不同血清型的钩体在基因组成上存在着差异,发现269个非保守基因,尤其在O抗原合成区(rfb),各检测菌存在大量基因缺失。
问号钩端螺旋体融合基因Lip21-LipL32真核、原核表达系统的构建
【目的】构建问号钩端螺旋体融合基因Lip21-LipL32真核及原核表达系统。【方法】采用连接引物通过PCR构建融合基因Lip21-LipL32,分别与相应的真核载体pVAX1及原核载体pET28b连接,真核重组质粒转染HEK293细胞,Western Blot检测其在真核细胞中的表达。原核重组质粒转入大肠杆菌BL21,用IPTG诱导重组蛋白表达,Western Blot检测表达蛋白的特异性。【结果】成功克隆出融合基因Lip21-LipL32的真核及原核重组质粒,表达产物经Western Blot检测验证了其特异性。【结论】成功构建Lip21-LipL32的真核及原核重组质粒,为进一步研究其免疫反应性,为融合基因DNA疫苗和蛋白疫苗的研制奠定了良好的基础。
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