H2AX磷酸化
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关键词:小檗碱 食管鳞癌 细胞周期停滞 H2AX磷酸化 c-myc
目的探讨小檗碱(berberine,Ber)对人食管鳞癌细胞株EC9706的生长抑制作用及其作用机制。材料与方法:用Ber作用E9706细胞后,采用光学显微镜观察细胞形态学变化,用MTT法检测不同浓度Ber在不同时间对EC9706细胞增殖的影响;采用TUNEL法和流式细胞仪Annexin-V Alexa 488/PI法检测Ber对EC9706细胞凋亡的影响;PI染色法检测经Ber作用后EC9706细胞周期分布的改变;用Western blotting检测Ber对EC9706细胞p53,c-myc,cyclin D1蛋白表达的影响;用免疫荧光方法检测由DNA双链断裂引起的H2AX磷酸化。结果Ber体外能显著抑制EC9706细胞的生长增殖,其抑制作用与药物浓度及作用时间呈正相关关系,作用48h EC9706细胞IC_(50)值约为50μM;Ber作用后DNA双链断裂明显升高,G2/M期细胞比例显著上调,但凋亡现象不明显;同时实验还发现Ber可以明显上调p53的表达并抑制c-myc和cyclin D1蛋白表达。结论Ber可诱发DNA损伤,并可通过细胞G2/M期阻滞而明显抑制EC9706细胞的增殖,上调野生型p53蛋...
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